衰老是神经退行性疾病的关键危险因素，它引起神经或免疫系统功能障碍和退化的渐进过程，从而导致认知障碍。许多研究都研究了衰老的具体机制，其中d-半乳糖是诱导动物衰老的来源之一。富含多酚的食物由于具有潜在的抗氧化、神经保护和认知增强作用，因此获得越来越多的关注。其中可可含有大量多酚，是有效的活性氧化物（ROS）清除剂。

可可在老化模型中的保护作用机制尚不清楚。这是首次研究可可在d-半乳糖诱导的衰老模型中的保护作用。本研究观察了d-半乳糖诱导的氧化应激以及可可粉对氧化应激、胆碱能损伤和细胞凋亡的保护作用。

1、体重，器官系数和食物摄入量

四组间初始体重无显著差异。但LC和HC组的终末体重和增重均显著低于C和G组（图1、表1）。与C组相比，G、LC和HC组的摄食量显著降低。大脑、肝脏、肾脏、心脏和肺的器官系数如图2所示。LC组、HC组、G组各脏器的脑、肺、心脏系数均显著高于其他各组，肝、肾系数各组间无显著差异。

注：C：对照组；G：d-半乳糖诱导衰老组；LC：d-半乳糖注射液加10%可可粉混合饲料；HC：d-半乳糖注射液与16%可可粉混合饲料

2、可可对血清、肝脏和大脑中的氧化应激保护作用

与 C 组相比，G 组的血清 MDA 和 AGEs 水平显著较高 。LC 组和 HC 组的血清 MDA 水平明显低于 G 组（p < 0.001），而 G 组的 AGEs 水平明显高于其余三组（p = 0.005）。肝脏和大脑MDA水平在G组中最高，与G组（p = 0.034，<0.001）相比，LC组和HC组显著下降（图3） 。

3、可可对脑胆碱系统损伤的改善

测定乙酰胆碱酯酶活性以评估胆碱能系统损害。与C组相比，G组脑组织中乙酰胆碱酯酶活性显著升高，而LC和HC组均显著降低(p <0.001）)(图4)。

4、可可对大脑抗氧化酶的影响

western blot检测SOD1、CAT和GPx1等抗氧化酶(图5)。在G组中，SOD1蛋白表达水平最低。LC组和HC组表达水平升高，但升高不显著。LC组和HC组CAT表达水平较G组显著升高(p=0.009);但与C组相似。相反，GPx1在HC组的表达量明显高于其余三组，而在G组中表达量最低(p=0.011)。

5、可可对脑内PI3K/Akt介导的Caspase-3通路的神经保护作用

PI3K和Akt作为抗凋亡信号分子，调节细胞存亡。PI3K在研究组之间没有任何显著差异，然而与G组相比，LC组和HC组的磷酸化Akt/Akt比值显著升高(p=0.044);LC、HC组、C组显示相似水平。相比G组，LC, HC组中的procaspase-3也变现出一个类似的增加趋势，其中LC和HC组的表达水平类似于C组(p = 0.001)。

综上所述，本研究表明d-半乳糖可诱导氧化损伤、胆碱能损伤和细胞凋亡。本次研究基于可可豆的保护机制假设(图7)。食用可可豆可改善SD大鼠d-半乳糖所致的损伤，激活Akt介导的caspase-3通路和脑内CAT表达，使乙酰胆碱酯酶失活。因此，本研究提示可可粉或可作为大脑健康衰老的治疗靶点的有效候选药物。