研究背景：基础研究与临床研究相结合，使风湿病研究突飞猛进。在诊断水平上，RA抗瓜氨酸肽抗体的发现是另一个突破。瓜氨酸是RA特异性自身抗体抗原决定因素的重要组成部分。检测循环中抗瓜氨酸肽(CCP)的抗体滴度，例如抗瓜氨酸肽抗体(ACPA)，用于各种类型关节炎患者的鉴别诊断、治疗随访和预后。

  基质金属蛋白酶(MMPs)在关节炎中的作用也被广泛研究。开放性的研究也可以追溯到1987年，当时Okada和同事描述了MMP-1/成纤维细胞胶原酶、MMP-2/明胶酶A，以及最重要的MMP-3/基质溶蛋白-1与关节炎疾病的关系。MMP-3，以及MMP-1和MMP-2，能够破坏软骨。在抗体诱导的关节炎动物模型中，MMP-2缺乏的小鼠增加了关节炎评分，而MMP -9缺乏的小鼠降低了关节炎评分。表明了MMP-2的保护作用和MMP-9的有害作用。在胶原诱导的小鼠关节炎中，抑制MT1-MMP可与抗TNF治疗协同延缓疾病进展。除了增加ACPA水平外，MMPs水平，特别是MMP-3水平，在关节炎患者的血清和滑膜液中增加，在血浆/血清或滑膜液中检测它们可分别用于诊断系统性和局部疾病。基质金属蛋白酶的直接功能为关节破坏，胶原溶解和蛋白聚糖的降解，基质金属蛋白酶的间接影响，导致自身免疫过程破坏，通过识别中性粒细胞MMP-9 /白明胶酶B，以及II型胶原糖基化残余表位的发现，以评估MMP抑制剂对自身免疫性疾病的治疗效果。

  目的：探讨明胶酶特别是明胶酶B/MMP-9的翻译后修饰(PTMs)，包括明胶酶的蛋白水解、多聚化、复合体形成和瓜氨酸化，并检测明胶-琼脂糖亲和纯化的滑膜液中是否存在与关节炎相关的特异性MMP蛋白。

  方法：采用酶谱分析方法检测潜在的、激活的、复杂的和截断的明胶酶A /MMP-2和明胶酶B/MMP-9的蛋白形态，以比较其特异性水平，以底物转换分析方法检测净蛋白水解活性，并通过Western blot分析截断的蛋白变体。通过使用一种新的改良瓜氨酸的单克隆抗体，使得瓜氨酸化检测的灵敏度增强。

  结果：用酶谱分析鉴定了滑液中所有MMP-9和MMP-2的蛋白形式，并对包括类风湿关节炎(RA)在内的各种关节炎疾病中MMP-9和MMP-2的水平进行了研究。其次，我们解决了对MMP-9水平与蛋白水解活性的误解。第三，在存档的RA滑膜液样本中发现了瓜氨酸化的截短的MMP-9蛋白，并在一个小的前瞻性RA样本队列中证实了它的存在。

结论：类风湿关节炎滑液中含有较高水平的MMP-9，包括截短型和瓜氨酸型蛋白。将基质金属蛋白酶-9(MMP-9)作为分析物与其瓜氨酸化的PTM相结合，可能具有临床应用价值，特别是在关节炎领域。

原文出处：Grillet B,  Yu K,  Ugarte-Berzal E,  Janssens R,et al.Proteoform Analysis of Matrix Metalloproteinase-9/Gelatinase B and Discovery of Its Citrullination in Rheumatoid Arthritis Synovial Fluids.Front Immunol 2021;12