对于怀疑库欣综合征的患者，首要步骤是建立正确的诊断。临床治疗中出现的大部分错误，导致进行不必要的影像学检查或手术。原则上讲，在除外外源性糖皮质激素使用引起的临床症状和体征后，需要评估疑诊病例是否具备多个库欣综合征的特征，对于意外发现肾上腺肿物的患者也需要除外库欣综合征

    如果数个试验的结果一致提示库欣综合征，那么库欣综合征的诊断成立。这些试验包括分别收集3次24h尿游离皮质醇测定结果均升高，夜间使用地塞米松不能抑制清晨皮质醇水平，皮质醇分泌节律消失伴午夜高皮质醇水平等。需要排除对这些诊断性试验结果有潜在影响的因素，如24h尿液标本收集不完整或者同时服用具有CYP3A4诱导作用的能快速使地塞米松失活的药物(如抗癫痫药、利福平等)。同时口服避孕药时，由于升高皮质类固醇结合球蛋白水平可导致口服地塞米松后总皮质醇不被抑制。因此如果结果可疑，可在停用雌激素4～6周后重复试验。假性库欣综合征状态的患者，如酒精相关或周期性库欣综合征等均需进一步检査以可靠地确定或排除库欣综合征的诊断。另外，生化检测方法可影响试验结果，如使用抗体的检测方法测定尿游离皮质醇。

    临床上，可以利用如下的诊治流程图进行诊断指导。

注：ACTH，促肾上腺皮质激素；CRH，促皮质素释放激素