间变性淋巴瘤激酶重排（ALK-R）和Ros原癌基因1重排（ROS1-R）是患者需要检测的重要生物标志物 晚期非小细胞肺癌(NSCLC)具有腺癌成分有各种各样的技术可用于评估这些变化，每种技术都有其优点、局限性和成本效益比在肺癌患者中，取样含有足够肿瘤细胞分数的令人满意和足够质量的组织是具有挑战性的。因此，必须对每个病例进行分类，使用一种简单，负担得起的，广泛使用的工具，如免疫组织化学(IHC)。

用于检测ALK和ROS1蛋白的一抗有不同的克隆，其中D5F3克隆(用于ALK)和D4D6克隆(用于ROS1)使用最多，并在许多研究中得到验证ALK D5F3 Ventana IHC使用酰胺扩增，从而减少用手工方法观察到的模糊染色模式。它被广泛用作一种单独的技术(伴随诊断)来检测ALK-R。即使使用这种标准化方法，也可能出现模棱两可的结果，需要使用替代方法来确认ALK-R。

相反，ROS1 IHC并不总是与ROS1- r相关，需要通过分子或细胞遗传学测试来证实考虑到ALK-/ROS1- r NSCLC中ALK和ROS1的无数融合伙伴，使用断裂探针的荧光原位杂交(FISH)是一种广泛使用的技术，通过使用位于ALK和ROS1基因断点两侧的探针来证明基因重排。。

后排信号为典型的分裂信号或孤立的30信号，其中30端为重排的ALK/ROS1基因的致癌段。许多商业化的FISH探针是可用的，其中Vysis LSI ALK分解(雅伯分子)是美国食品和药物管理局(FDA)批准的ALK- r伴随诊断，而没有一个被批准用于ROS1-R FISH。

根据所使用的FISH分解探针的类型(多重FISH与单基因分解)和探针长度的不同，解释可能会有所不同，尽管后者在大多数商业探针中基本相似。允许在初始验证后使用推荐的15%截止值。鉴于与IHC相比，FISH检测的成本和技术专长都有所增加。

2023年12月6日发表在ARCHIVES OF PATHOLOGY & LABORATORY MEDICINE的文章，其目的是评估FISH检测作为ALK和ROS1 IHC补充的效用，并确定将FISH纳入EGFR和ALK-/ROS1- r的常规预测性生物标志物检测算法的成本和时间效益。

本研究具有雄心勃勃的，历时4.5年，肺腺癌样本通过实时聚合酶链式反应接受EGFR突变测试，以及通过免疫组织化学进行ALK/ROS1重组测试（Ventana D5F3测定间变性淋巴瘤激酶蛋白；用D4D6克隆手动测定Ros原癌基因1蛋白）。荧光原位杂交在所有间变性淋巴瘤激酶模棱两可和Ros原癌基因1免疫阳性病例中进行了原位杂交。

研究结果显示，在包括18774个样本中，27%（1796年中的481个）检测到了EGFR突变。10%（119中的174）的试样中，增生性淋巴瘤激酶免疫组织化学在3%（1719中的58）中模棱两可。ALK荧光原位杂交显示81%（95个中的77个）与免疫组织化学一致。

免疫组织化学上的Ros原癌基因1（ROS1）蛋白表达模式

13%（125例中的190例）中发现了Ros原癌基因1免疫阳性，19.3%（135例中的26例）的杂交确认重新排列，所有这些样本在肿瘤细胞中都表现出弥漫性、强到中等强度的细胞质染色。Ros原癌基因1蛋白在没有重组的情况下过度表达在EGFR突变和ALK重组腺癌中明显常见。

综上所述，使用ALK Ventana D5F3克隆的IHC是ALK-R测试的强大主要方法，优于FISH分析，后者仅在染色结果模糊的情况下增加价值。强到中度肿瘤特异性染色高度预测潜在的ALK易位。对于ROS1-R分析，很容易实施IHC筛查，然后用FISH进行确认。在资源或组织有限的环境中，对EGFR突变和ALK重排呈阴性的ROS1蛋白弥漫性强至中等强度染色的病例可能会优先用于ROS1 FISH。

原始出处

Aruna Nambirajan, Ridhi Sood, Warisa Khatoon, Prabhat Singh Malik, Anant Mohan, Deepali Jain; Concordance of Immunohistochemistry and Fluorescence In Situ Hybridization in the Detection of Anaplastic Lymphoma Kinase (ALK) and Ros Proto-oncogene 1 (ROS1) Gene Rearrangements in Non–Small Cell Lung Carcinoma: A 4.5-Year Experience Highlighting Challenges and Pitfalls. Arch Pathol Lab Med 2023; doi: https://doi.org/10.5858/arpa.2023-0229-OA