一、前言

在所有CAR构建体中，特定生物标志物可为抗CD19的CAR-T细胞治疗的作用机制提供见解，并可能成为预后的预测因子。血液中的抗CD19的CAR-T扩增发生在输注后的前1至2周，随后是收缩期。值得注意的是，输注后抗CD19的CAR-T细胞扩增峰的大小正在成为不同CAR T细胞产物和不同CD19表达恶性肿瘤中临床反应的关键预测因子，这强调了输注后CAR T细胞扩增的重要性。

二、细胞单采

在CAR-T临床试验中，使用标准单采设备在研究点采集单采材料，或同等设备。单采过程通常需要3-4h，对应于约10-20l的再循环血液，并产生约100-500mL的单采物质收集量。然后，将单采材料收集袋在1–10°C下用经验证的运输容器运送至中心制造工厂，在那里对其进行处理，以在封闭系统上富集含T细胞的PBMC部分。

然后使用抗CD3单克隆抗体激活PBMC部分中的t细胞，并在含有300 IU/mL白细胞介素(IL)-2的无血清培养基中培养.磁珠不用于细胞选择或激活。用携带抗CD19 CAR基因的逆转录病毒载体转导活化的T细胞，然后进一步扩增。

三、细胞扩增

在培养和扩增CAR T细胞时，检测CAR T细胞总数是否达到目标剂量，对于临床试验，目标剂量为2X 10~6 CAR T细胞/kg体重。达到CAR-T的目标剂量后，将产物洗涤并冷冻保存。

每个CAR T细胞批次均经过一系列批次释放试验，以确保产品功能正常、无菌且无其他污染物，包括可复制的逆转录病毒颗粒。在满足验收和产品放行标准后，使用经过验证的冷冻器准备将CAR T细胞产品运回研究临床试验点。该流程符合GMP要求，正在扩大规模以满足潜在的商业需求。

四、生产工艺

尽管单采材料成分和基线淋巴细胞计数(基线ALC 100/lL)存在患者间的可变性，但CAR-T生产工艺实现了非常高的成功率并允许产生CAR-T细胞，即使是在严重淋巴细胞减少症的情况下。

在第2阶段，将产品交付至研究点，用于全部分析集中的患者。在单采和CAR-T终产物分析中，终产物包含一个CAR T细胞群，该细胞群表达与中枢记忆或效应记忆T细胞相关的标记物。

五、临床疗效

在对101例患者进行的ZUMA-1分期2的初步分析中报告了一致的结果，ORR为82%，包括弥漫性大B细胞淋巴瘤(n 77)和转化滤泡性淋巴瘤或原发性纵隔B细胞淋巴瘤(n 24)患者的CR率为54%，以及6个月的随访。在所有患者中，分别有13%和28%的患者出现3级细胞因子释放综合征或NE。

在其他三项针对套细胞淋巴瘤和成人及儿童急性淋巴细胞白血病的条件化疗后的独立CAR T细胞治疗研究中，正在评估相同的抗CD19 CAR构建体。此外，目前正在一项针对难治性弥漫性大B细胞淋巴瘤患者的研究中对CAR-T进行研究，评估条件化疗和CAR T细胞，随后使用阿替唑单抗进行有限疗程的PD-L1阻断。

六、展望

抗CD19的CAR-T细胞疗法是治疗难治性侵袭性B细胞非霍奇金淋巴瘤的一种有前途的方法。尽管在难治性侵袭性非霍奇金淋巴瘤中的疗效令人印象深刻，但抗CD19的CAR-T细胞治疗与独特且可逆的毒性综合征相关，如细胞因子释放综合征和神经系统事件。

七、讨论

在未来几年，工程化T细胞可作为治疗其他血液和实体恶性肿瘤的平台，评估抗CD19的CAR-T细胞在侵袭性B细胞型NHL治疗早期的作用，探索CAR T细胞与其他免疫疗法和新型癌症疗法的合理结合，描述疗效和毒性的细胞和分子机制的差异，以实现产品优化，从而提高CAR T细胞的治疗指数。将抗D19 CAR T细胞建立的概念验证扩展至其他血液恶性肿瘤和实体瘤。

【作者声明】本文编译自Zachary J. Roberts的“Axicabtagene ciloleucel, a first-in-class CAR T cell therapy for aggressive NHL”。