目前针对非小细胞肺癌最有效的手段是个体化靶向治疗，常见的靶点有C-met、ALK和EGFR。有研究表明^[1]，在非小细胞肺癌患者体内,表皮生长因子受体（EGFR）的突变最为常见，其中约30%~40%的亚洲NSCLC患者在确诊时携带EGFR突变，尤其是无吸烟史的中年女性。因此，EGFR抑制剂成为肺癌治疗的最大研究热点之一。

目前EGFR抑制剂共有四代，其中第一代的代表性抑制剂为吉非替尼和厄洛替尼，第二代的代表性抑制剂为阿法替尼，第三代的代表性抑制剂为AZD9291和CO1686（5），第四代代表性抑制剂为EAI045。由于第一代抑制剂出现的耐药性问题,使得以后的抑制剂都在针对耐药基因突变来设计抑制剂结构。主要的耐药突变有L858R/T790M双突变和C797S。HaoY等^[2],针对EGFRT790M突变设计了第三代EGFR抑制剂。作者将已报道的化合物5和化合物7进行分子融合和骨架跃迁，获得一系列新骨架类型的EGFR三代抑制剂，其中化合物20g各方面药理数据最优，其对野生型EGFR蛋白的选择性为263倍，在细胞中的选择性为35.5倍。体内抗肿瘤实验表明，H1975细胞移植瘤小鼠的肿瘤抑制率为73.2%，在A431细胞移植瘤小鼠的肿瘤抑制率为37.2%。（图1）

图1化合物20g的设计（图片来源：《J. Med. Chem.》）

化合物5（CO1686）和化合物7是已报道的针对EGFRL858R/T790M双突变的三代抑制剂。作者将两个分子与EGFR蛋白的结合模式进行叠合，发现它们存在着很多相似的结合模式：1）氨基嘧啶部分可以与蛋白铰链区的Met793形成两个氢键作用；2）左侧的亲水尾部伸向溶剂区；3）右侧的丙烯酰胺部分与蛋白的Cys797形成共价键。此外，由于EGFR发生T790M突变，诱导蛋白中出现两个口袋（S1和S2），其中化合物5的三氟甲基占据S1口袋，化合物7的N-甲基占据S1口袋。作者设想通过分子融合和骨架跃迁的策略设计化合物14a，使其能够同时占据S1和S2口袋，进一步提高活性和选择性。分子对接结果显示，化合物14a在保留了以上相互作用的基础上，R3位置的甲基可以伸向S2口袋，这与他们的设计初衷相符合。（图2）体外酶活性结果显示，化合物14a对EGFRL858R/T790M和EGFRWT的酶活性分别为46nM和180nM,选择性仅为4倍。细胞实验表明，化合物对H19751细胞株（表达EGFR-L858R/T790M）和A431细胞株（过表达EGFRWT）均活性较弱，IC50大于10μM。随后作者通过在R3位置引入取代基来改善化合物的细胞透膜性，以及对伸向溶剂区的部分进行改造，最终获得了选择性高活性好的化合物20g，其对EGFRL858R/T790M和EGFRWT的酶活性分别为0.3nM和79nM，选择性高达263倍。

图2.（A）化合物5和7的结构；（B）化合物5和7与 EGFR 蛋白结合的分子叠合图；（C）化合物14a与 EGFR 蛋白的分子对接图；（D）新骨架化合物与靶蛋白的 2D 模式图。（图片来源：《J. Med. Chem.》）

Western Blot实验进一步评价化合物20g对EGFR信号通路的影响，结果如图3所示，化合物20g在1nM浓度下可以抑制H1975细胞（表达EGFR-L858R/T790M）中EGFR蛋白的磷酸化以及下游AKT蛋白的磷酸化。而在A431细胞株（过表达EGFRWT）中，只有浓度达到100nM时才对EGFR和AKT的磷酸化产生抑制。这一结果表明，化合物20g在细胞水平具有很好的选择性，并且靶向EGFRL858R/T790M。

图3. Western Blot实验（图片来源：《J. Med. Chem.》）

体内药效实验表明，50mg/kg口服给药14天后，化合物20g可以显著抑制H19751移植瘤小鼠的肿瘤生长，肿瘤抑制率达到73%，实验前后小鼠体重没有显著影响，证明化合物没有明显的毒性。而对于A431移植瘤小鼠模型，50mg/kg口服给药14天后，化合物20g对小鼠肿瘤的抑制率较低。（图4）

图4. 化合物20g的体内抗肿瘤实验。（图片来源：《J. Med. Chem.》）

思考：

随着精准医疗时代的到来，其相比传统诊疗手段具有更高的精准性。人们通过基因测序寻找个体化癌症突变基因，从而迅速确定对症药物。这不仅节约寻找治疗方法的时间，还可以提升治疗效果。 EGFR突变具有其独特的患病人群，针对这一人群发展靶向 EGFR 突变的药物可以更有效的治疗非小细胞肺癌患者。Hao Y等通过分子融合和骨架跃迁的方法获得高选择性和高活性的三代EGFR抑制剂（20g），为治疗非小细胞肺癌患者提供了新的化学实体分子。

参考文献

[1]Hamaguchi R,etal. Effects of anAlkaline Diet onEGFR-TKI Therapy inEGFRMutation-positiveNSCLC.Anticancer Res.2017Sep;37(9):5141-5145.

[2]Hao Y, et al.Design, Synthesis, and Biological Evaluation of Pyrimido[4,5- d]pyrimidine-2,4(1 H,3 H)-diones as Potent and SelectiveEpidermal Growth Factor Receptor (EGFR) Inhibitors against L858R/T790M Resistance Mutation.JMed Chem.2018